96. Jahresversammlung der Deutschen Gesellschaft für Hals-Nasen-Ohren-Heilkunde, Kopf- und Hals-Chirurgie

PD Dr.

NUR Wissenschaftliches Programm / ONLY Scientific Programme

PD. Dr. med.

Prof. Dr. med.

Dr. rer. nat

Prof. Dr. rer. nat.

Prof., Dr.

Therapieüberwachung von chirurgisch behandelten Oropharynxkarzinom-Patienten mittels zellfreier DNA des humanen Papillomavirus

Tumormarker

ONKO-TUMA

Einleitung: Die Inzidenzrate von HPV-positiven Plattenepithelkarzinomen des Oropharynx (oropharyngeal squamous cell carcinoma, OPSCC) ist steigend. Trotz einer guten Prognose kann ein Tumorrezidiv die gesundheitsbezogene Lebensqualität (health-related quality of life, HRQoL) beeinträchtigen und die Sterblichkeit erhöhen, sodass der Therapieüberwachung eine besondere Bedeutung zukommt. Ein potenzieller Biomarker hierfür stellt die zellfreie HPV-DNA (cfDNA) aus Blutplasma dar.Material und Methoden: Die Plasmaproben von 27 OPSCC-Patienten (HPV-positiv = 19, HPV-negativ = 8) wurden zu Therapiebeginn und während durchschnittlich 4 postoperativen Follow-up-Untersuchungen über einen Zeitraum von 11 Monaten mit einem digitalen Multiplex-PCR-Assay auf cfDNA von 6 Hochrisiko-HPV-Typen untersucht. Das Vorhandensein von HPV-cfDNA wurde mit dem HPV-Tumorstatus verglichen, der durch p16INK4a-Immunhistochemie, HPV-DNA, HPV-RNA und HPV16-E6-Serologie bestimmt wurde.Ergebnisse: Zu Therapiebeginn war die Sensitivität des HPV-cfDNA-Nachweises bei HPV-positiven OPSCC-Fällen 89 %, während die Spezifität bei HPV-negativen OPSCC-Fällen 100 % betrug. Der Nachweis von HPV-cfDNA hatte bei mehreren Nachuntersuchungen einen positiven Vorhersagewert von 67 % für ein Tumorrezidiv innerhalb von 3 Jahren und einen negativen Vorhersagewert von 100 %. In Fällen von rezidivierendem HPV-positivem OPSCC war die HPV-cfDNA 6,8 und 8,2 Monate vor der Entdeckung des Rezidivs durch routinemäßige Nachuntersuchungsmethoden nachweisbar.Schlussfolgerung: Die Therapieüberwachung von HPV-positiven OPSCC-Patienten könnte durch eine postoperative HPV-cfDNA-Untersuchung ergänzt werden, um frühzeitig ein Tumorrezidiv zu erkennen und entsprechend die Chancen für eine nachfolgende erfolgreiche Intervention zu verbessern.Nein

Kopf-Hals-Onkologie

ONKO

Freier Vortrag

Dr. rer. nat.

Univ.-Prof. Dr. med.

Prof.

Prof. Dr.

Dr. med.

cfDNA-Methylierung als Marker für das pathologische Ansprechen nach neoadjuvanter Immuntherapie bei HNSCC

Experimentelle Onkologie

ONKO-EXP

Introduction Immune check point inhibition (ICI) has revolutionized oncology. Unfortunately, patients with Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) are still awaiting the perspective-changing benefits of this therapeutic modality, despite promising data in neoadjuvant settings. Radiological assessment of tumour response to ICI is challenging as it fails to account for tumour viability. Additionally, a metric for the prediction of recurrence remains an unmet clinical need. Building on promising pilot data derived from cfDNA-methylation analysis of HNSCC, the clinical utility of cfDNA-methylation marks as a prognostic indicator for pathological response following ICI and disease recurrence will be evaluated.Methods Plasma samples from 20 patients who received PDL1-checkpoint-Inhibitor Atezolizumab three weeks before curative surgery as part of a single-arm, Phase-II-study (PIONEER, EudraCT-Number: 2018-000254-21) shall be analyzed. cfDNA-methylation profiles derived from samples acquired at different timepoints shall be analysed with immune-related pathological response and patient follow-up data to identify response and relapse cfDNA-predictors.Expected Results Pilot data from HNSCC has established the feasibility of cfDNA-methylation analysis from plasma. Based on these preliminary data it is anticipated that cfDNA-methylation-based prognosticators for pathological response and disease recurrence will be identified. This approach could refine surgical decision-making and optimize neoadjuvant ICI strategies.Conclusion This study aims to establish cfDNA-methylation as a non-invasive tool for the stratification of HNSCC patients in view of ICI treatment and monitoring disease progression to inform timely interventions and guiding personalized therapy approaches.This research was made possible through the imCORE Network supported by F. Hoffmann-La Roche. The Departments of Otorhinolaryngology and Medical Oncology and the BIT are members of the imCORE Network.

Einsatz von zellfreier Tumor-DNA zur präoperativen Therapieplanung bei Patienten mit HNSCC und klinisch negativem Lymphknotenstatus (cN0)

Einleitung Diagnosestellung, prognostische Einschätzung sowie der endgültige Therapieerfolg bei Patienten mit HNSCC erfordern eine korrekte Klassifizierung des Lymphknotenstatus. Bei Patienten mit cN0-Status, bleibt die Wahl der geeigneten Therapie intensiv diskutiert. Biomarker wie zellfreie zirkulierende Tumor-DNA (ctDNA) könnten die Erkennung von metastasierten Halslymphknoten potenziell verbessern und so das Management des cN0-Halses optimieren.Methoden In einer prospektiven Kohortenstudie (LiC0HN-Studie) haben wir untersucht, ob ctDNA bei Patienten mit cN0 HNSCC (n=75) den Lymphknotenstatus prognostisch einschätzen kann. Prä- und postoperative Plasma- sowie Kapillarblutproben (DBS) von Patienten mit HNSCC (Stadium I-IV), die eine primäre chirurgische Behandlung erhielten, wurden untersucht. Es erfolgte Whole Genome Sequencing von zellfreier DNA aus Plasma und DBS sowie korrespondierender Tumor-DNA. Zur Identifizierung potenzieller Methylierungs-Biomarker führten wir eine Methylom-Sequenzierung an FFPE-Gewebe (Primärtumor und Lymphknoten) von Patienten mit/ohne Lymphknotenmetastasen (n=10 pro Kohorte) durch.Ergebnisse Wir konnten Veränderungen der Kopienzahl in prä- und postoperativen Proben identifizieren. Unsere Analyse zur Identifizierung differenziell methylierter Biomarker für zervikale Lymphknotenmetastasen zeigte 22 differenziell methylierte Regionen, die sowohl im Primärtumor als auch in der entsprechenden Lymphknotenmetastase vorhanden waren. Die Analyse der Plasma- und DBS-Proben wird zusammen mit Daten aus der gesamten Patientenkohorte präsentiert.Diskussion Der Einsatz der ctDNA-Analyse bei chirurgisch behandelten Patienten mit HNSCC hat Potenzial, um Therapieentscheidungen, einschließlich der chirurgischen Planung der Neck Dissection, zu unterstützen.Nein

Priv.-Doz. Dr. med.

Neue Zielstrukturen für die Fluoreszenz-gestützte Chirurgie von HNSCC

Introduction: Fluorescence-guided surgery is a promising technique to further enhance precision in tumor resection for treatment of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). As distinct cell surface adhesion and signaling molecules (CSASMs) are substantially overexpressed in HNSCC, these molecular structures might represent potential targets for novel fluorescence-guided surgical strategies.Material & methods: Employing immunostaining along with flow cytometry or epifluorescence and confocal microscopy, we first evaluated expression patterns of various antibodies directed against different CSASMs in single human HNSCC and non-malignant cells as well as in human HNSCC and non-malignant tissue specimens. In a translational approach, fluorescence microscopy was employed ex vivo for intraoperative margin identification in human HNSCC (topical application) as well as in vivo in a heterotopic, syngeneic mouse HNSCC model (cell line SCC VII, auricle; intravenous application) upon administration of selected near-infrared fluorescent IRDye800CW-labeled antibodies.Results: As assessed by flow cytometry and fluorescence microscopy, immunostaining by fluorescent antibodies directed against selected CSASMs revealed a significantly higher fluorescence signal in HNSCC as compared to non-malignant cells or tissue. Moreover, IRDye800CW-labeled antibodies enabled clear delineation of human HNSCC from adjacent non-malignant tissue upon ex vivo immunostaining or in vivo in the mouse HNSCC model.Discussion: Targeting selected CSASMs in HNSCC via IRDye800CW-labeled antibodies allows to distinguish HNSCC from adjacent non-malignant cells/tissue in vitro, ex vivo, and in vivo and has the potential to significantly enhance margin assessment and thus precision in tumor resection.Nein

Dr. rer. medic

Univ. Prof. Dr. rer. nat

Überwachung des Krankheitsstatus bei Patienten mit HPV-assoziiertem Oropharynxkarzinom mittels Liquid Biopsy

Einleitung Weltweit nimmt die Häufigkeit der HPV-assoziierten Oropharynxkarzinome (HPV+ OPSCC) zu. Im Falle eines Tumorrezidivs ist eine kurative Therapie erschwert. Es ist von hoher klinischer Relevanz, molekulare Parameter zu erheben, welche das Therapieansprechen überwachen.Methode Ziel ist die Etablierung einer HPV-gerichten, Blut-basierten Analytik (Liquid Biopsy), um eine Frühdiagnostik sowie eine Überwachung des Krankheitsverlaufs zu ermöglichen. Zu diesem Zweck erfolgt die Archivierung von Tumor-DNA (ct-DNA) aus Blutproben von Patienten mit HPV+ OPSCC bei Erstdiagnose, während der Behandlung sowie in der klinischen Nachsorge und im Falle eines Rezidivs. Derzeit umfasst unsere Biobank >1700 ct-DNA Proben von >300 HPV+ OPSCC Patienten.Ergebnis Bei 434ct-DNA Proben von 53 Patienten mit HPV+ OPSCC erfolgte eine Bestimmung der E6 HPV-16 DNA-Sequenz mittels quantitativer PCR (qPCR) sowie digital droplet PCR (ddPCR). In allen Fällen erfolgte eine Diagnostik mittels p16-IHC, HPV16-DNA-PCR für E6 & L1 sowie die Bestimmung der viralen Last im Tumor. Es bestand eine hohe Korrelation zwischen den Messverfahren der qPCR und ddPCR (p<0.001), wobei mittels ddPCR eine höhere Sensitivität und Spezifität erzielt wurde (>80%). Die erfolgreiche Bestimmung der HPV-16 ctDNA korrelierte signifikant mit Tumorstadium und -volumen (p<0.05). In einzelnen Fällen konnte bereits Monate vor Rezidivdiagnose ein positives HPV ct-DNA Signal bestimmt werden.Diskussion Die ddPCR der E6-DNA im Blut ist ein vielversprechendes diagnostisches Verfahren zu molekularen Überwachung des Therapieverlaufs bei HPV+ OPSCC. Prospektive Studien sind erforderlich, um weiterhin klinisch die Relevanz der ct-HPV16-E6-DNA als Marker für den Therapieerfolg sowie für die Nachsorge zu bestätigen.J.G. is consultant to DISCO Pharmaceuticals, and received honoraria from MSD and Boehringer Ingelheim.J. P. Klußmann received honoraria from MSD and Boehringer Ingelheim.

cand. med.

Abhängigkeit extrazellulärer Vesikel miRNA von HPV-Status, N-Status und Therapie bei Kopf-Hals-Karzinomen – eine prospektive Liquid Biopsy Analyse

Einleitung Die Forschung zu Kopf-Hals-Tumoren (HNSCC) fokussiert zunehmend auf Flüssigbiomarker zur Verbesserung von Früherkennung, Diagnose und Therapiekontrolle. Ein Ansatz ist die Untersuchung von mikro-RNAs (miRNAs) in extrazellulären Vesikeln (EVs) mittels Liquid Biopsies aus Blutproben. Material/Methode Es wurden Liquid Biopsies an zwei Zeitpunkten – vor Therapiebeginn und im Durchschnitt 12 Monate nach Erstdiagnose eines HNSCC – durchgeführt. EVs wurden aus Blutserum isoliert und die miRNAs -21, -1246, -let-7a, -181a und -26a mittels PCR quantifiziert. Die Expression der EV-miRNAs wurde mittels gemischt linearer Modelle in Bezug zu HPV-Status, N-Status und Therapieart analysiert. Ergebnisse In die Studie wurden im Zeitraum 2022 bis 2024 14 HPV+/p16+ und 34 HPV-/p16- HNSCC aus unserer Klinik eingeschlossen, vorwiegend Oropharynxkarzinome (OPSCC, 45%). 90% der Patienten wurden operativ erstbehandelt. Zum Diagnosezeitpunkt waren EV-miR-21, -181a und -let-7a in HPV/p16+ HNSCC signifikant höher exprimiert (p<0,01). Über 12 Monate stieg die EV-miR-21- und miR-1246-Expression bei Patienten mit positivem Lymphknotenstatus und HPV-/p16- Tumoren (p<0,05 bzw. p<0,001). Zudem zeigten EV-miR-181a und -26a bei operierten Patienten eine höhere Expression im Verlauf als bei Patienten mit definitiver Radiochemotherapie (p<0,05) sowohl bei allen HNSCC als auch in der OPSCC Subgruppe. Diskussion Die beobachteten EV-miR-21-Veränderungen bestätigen dessen Eignung als Tumormarker. Die Ergebnisse erweitern das Wissen zu EV-miR-181a und EV-let-7a in Bezug auf HPV-Abhängigkeit, was ihr Potenzial als Marker zur HPV-Früherkennung bei HNSCC unterstreicht. Die Korrelationen von EV-miR-181a und -26a mit der Therapieart legen zudem nahe, dass sie zur Therapieüberwachung genutzt werden könnten.Nein

Identifizierung von B-Zell-Subpopulationen mit pro- und anti-tumorigenen Eigenschaften in einem immunkompetenten Mausmodell des Plattenepithelkarzinoms des Kopfes und Halses

Einleitung: Tumor-infiltrierende B-Zellen beeinflussen das Tumorwachstum und die Therapieeffizienz. Verschiedene B-Zell-Subpopulationen im Immunsystem spielen sowohl fördernde als auch hemmende Rollen bei der Tumorprogression im Plattenepithelkarzinom des Kopfes und Halses (HNSCC).Material und Methoden: Ein murines HNSCC-Modell wurde durch Injektion von SCC-VII-Zellen in die Mundhöhle etabliert. 21 Tage nach Tumorinduktion wurden Immunzellen aus Blut, Milz, Lymphknoten und Tumoren isoliert und mittels Durchflusszytometrie und Immunhistochemie analysiert. Die Immunglobulinspiegel wurden per ELISA an den Tagen 0, 7, 14 und 21 gemessen.Ergebnisse: GL7+ CD95+ Keimzentrums-B-Zellen und CD39+/CD73+ B-Zellen nahmen in Tumoren, Lymphknoten und Milzen der tumortragenden Mäuse zu. Die IgM-Konzentration im Serum stieg kontinuierlich an, während die IgG1-, IgG2- und IgG3-Spiegel nach dem Klassenwechsel zunahmen. Wir beschreiben erstmals Marginalzonen-B-Zellen (MZB) im Tumormikromilieu. Die CD39+/CD73+-Expression war auf MZB am stärksten ausgeprägt, weniger auf follikulären und nicht-follikulären B-Zellen.Diskussion: Die Intervention führte zur Freilegung von Tumorantigenen, was die Bildung von Keimzentren und antitumoralen Immunstrukturen in Milz- und Tumorgeweben förderte. MZB-Zellen zeigen durch erhöhte CD39+/CD73+-Expression immunsuppressives Potenzial. Die verringerte CD39+/CD73+-Expression auf follikulären B-Zellen deutet auf unterschiedliche Funktionen bei der Tumorprogression hin. Der verzögerte Anstieg der IgG- im Vergleich zu IgM-Konzentrationen korreliert mit der Keimzentrumsreaktion und dem Anstieg von MZB-Zellen. Sowohl anti- als auch pro-tumorigene B-Zell-Populationen im HNSCC-Mikromilieu könnten Ziele für innovative Immuntherapien darstellen.Nein

Prof. Dr. phil. nat.

Radiotherapie führt in Tumorzellen und tumorassoziierten Fibroblasten zur Induktion von Seneszenz, die den Therapieerfolg gefährden kann

Einleitung Die Radiotherapie ist immer noch ein wichtiger Bestandteil der Behandlung von Kopf- und Halstumoren (HNSCC), dennoch treten bei 15-50% der Patienten lokale Rezidive auf. Jüngste Studien deuten darauf hin, dass Seneszenz eine Schlüsselrolle bei der Rezidiventstehung spielen könnte. Ziel der Studie war es, zu untersuchen, ob sich nach einer Radiotherapie seneszente Zellen entwickeln und welche Eigenschaften diese besitzen.Material und Methoden Um die radiotherapie-induzierte Seneszenz genauer zu beleuchten, wurden die Eigenschaften von Tumorzellen sowie tumorassoziierter Fibroblasten (CAFs) nach dem Überleben einer Bestrahlung in vitro untersucht. Es wurden morphologische Merkmale, Proliferation, Zellzyklusverteilung, Zelltod und Migration untersucht.Ergebnisse Nach Bestrahlung entstanden ruhende Tumorzellen, die typische Eigenschaften seneszenter Zellen wie einen Arrest des Zellzyklus sowie eine gesteigerte perinukleäre β-Galactosidase-Aktivität aufwiesen. Zudem traten auch CAFs in die Seneszenz ein. Dies führte zu einer gesteigerten Migration der CAFs sowie zur Ausschüttung von Seneszenz-assoziierten Botenstoffen (SASP). Außerdem konnten die zunächst ruhenden Tumorzellen nach einigen Wochen die Fähigkeit zur Proliferation wieder erlangen. Dies zeigt, dass Seneszenz nicht zwingend ein dauerhaftes Zellschicksal ist.Diskussion Die Studie offenbart, dass die radiotherapie-induzierte Seneszenz von Tumorzellen ein therapeutisches Problem darstellen kann. Darüber hinaus tragen seneszente Zellen in der Tumormikroumgebung, z.B. CAFs, möglicherweise dazu bei, dass ein Milieu entsteht, das eine Rezidiventstehung zusätzlich begünstigt. Daraus ergibt sich, dass die Effektivität der Radiotherapie verbessert werden könnte, indem seneszente Zellen gezielt eliminiert werden.Nein

Optimierung der Prognoseeinschätzung von high-risk Kopf-Hals-Karzinom-Patienten – die Rolle von Tumor Budding und Etablierung eines neuen histomorphologischen Scoring Systems

EinleitungDas klinische Management und die Prognoseeinschätzung von Plattenepithelkarzinomen des Kopf-Hals-Bereichs (HNSCC) stellen eine große klinische Herausforderung dar. Die derzeit eingesetzten prognostischen Biomarker sind vielfach mit hohen Kosten und anspruchsvollen Methoden verbunden. In diesem Kontext erweisen sich histomorphologische Biomarker wie "Tumor Budding" (TB) und "poorly defined clusters" (PDC) als vielversprechende, kosteneffektive prognostische Indikatoren, mit jedoch bisher noch eingeschränkter Evidenz in der Kopf-Hals-Onkologie.Material/MethodenDie prognostische Relevanz von TB und PDC in Kombination mit stromalen tumorinfiltrierenden Lymphozyten (sTILs) sowie dem Tumor-Stroma-Verhältnis (TSR) wurde in einer Kohorte von 50 HNSCC Patienten evaluiert unter weiterer Berücksichtigung des HPV-Tumorstatus und der PD-L1 Expression. Zudem wurde basierend auf diesen Variablen ein neuartiges Scoring-System zur Prognoseeinschätzung entwickelt.ErgebnisseSowohl TB (p=0,0499) als auch PDC (p=0,0235) zeigten einen signifikanten Einfluss auf das Gesamtüberleben der Patienten. Das darauf basierende, neu entwickelte Scoring-System zeigte eine deutliche Korrelation mit dem Gesamtüberleben der Patienten (p=0,0200). Eine Korrelation zwischen der PD-L1-Expression und der Bildung von TB und PDC konnte nicht nachgewiesen werden. Der HPV-negative Status hingegen war mit einer höheren Anzahl von TB assoziiert.DiskussionDie Ergebnisse dieser Studie deuten darauf hin, dass die prognostische Relevanz von TB und PDC bei HNSCC möglicherweise höher einzuordnen ist als die von herkömmlichen Biomarkern, so dass diese praktikable und kosteneffiziente Alternative zu den derzeit etablierten Verfahren in prospektiven Studien weiter evaluiert werden sollte.NEIN

Session 74
Onkologie – Experimentell 4

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Vorsitzende

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Session 74Onkologie – Experimentell 4

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Onkologie – Experimentell 4